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预染蛋白marker

2017-09-21      876

    蛋白marker可分为未预染的Marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准以及预染的Marker即单色预染和多色预染。那么,什么是预染蛋白marker?预染蛋白marker为一些纯化好的蛋白的混合物.这些蛋白混合物与一种蓝色染料共价偶联.可在凝胶电泳时出现强度均匀的8条带.同未预染的蛋白marker相比,预染蛋白marker因与染料共价偶联而在SDS-PAGE电泳时的迁移特性发生某些改变.
    预染蛋白分子量标准:预染蛋白分子量是一些纯化好的蛋白混合物,通过与染料共价耦联,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白分子量的出现方便了我们的实验,这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后,以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率   比如,已知垂直电泳zui佳分辨区域大约在胶的2/3处,如果使用预染蛋白Marker就可以预测目标蛋白进入zui佳分辨区时停止电泳以得到zui佳分辨效果,如果观察到Marker电泳异常也可以及时终止电泳,另外在Western Blot转膜以后可以直接观察蛋白转膜是否完全,还可以在膜上标记蛋白分子量,所以吸引了许多实验室人员购买预染蛋白标准。值得注意的是预染蛋白Marker与染料共价耦联,所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化,可能导致一些偏差,所以不太适合定位蛋白  不过多数情况下Marker的条带未必能和我们的目标蛋白完全一样,我们得到的也不过是一种相对Marker指示的参考大小,zui后都需要Western来定性,所以如果不是要区分大小相近的条带,预染Marker还是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。
    预染蛋白标准可以分为两种:单色预染和多色预染,其实区别就在于帮助在实验过程中辨认某个条带的大小—Marker条带越多参考价值越大,可就越难辨认区分,如果用不同的颜色来区别就比较好辨认。单色的Marker通常是利用其中某些条带加倍浓度来提示其大小的。还有一点特别要注意,由于转膜是一个将胶里的Marker浓缩在洁白的膜上,所以需要的上样量相对少一些,如果想要在电泳过程中看到美丽的“彩虹”,或者单色的Marker往往需要比说明书里多加一些Marker的。
非和有什么区别
    非电泳时看不到条带,染色后才能看到,而会有特定的某些蛋白条带带有颜色,电泳过程中可以观察到,还有在WB过程中也起到转膜是否成功的指示作用。
    预染的marker的分子量在不同浓度胶上跑出来是不一样的,这个叫表观分子量。未预染的marker是zui准确的,如果只做wb,预染的marker就够了,每次都能观察转膜情况。
澳洲幸运10开奖视频直播    其他都是些细节上的区别,比如有些会做成彩虹色的,以便区别分子量大小有些的条带比较多等等。