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透析袋如何使用

2016-07-07      728

澳洲幸运10开奖视频直播  透析已成为生物化学实验室zui简便zui常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度。透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的zui多的还是用纤维素(再生纤维素RC、纤维素酯CE、PVDF等)制成的透析膜,目前常用的是美国美国光谱医学公司(spectrumlabs)和美国UnionCarbide(联合碳化物公司)生产的各种尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的zui小分子量,缩写为MwCO)大概有100-500、500-1000,1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等种类,单位为道尔顿(D)。商品透析袋制成管状,其扁平宽度为8mm~77mm不等。为防干裂,出厂时都用10%的甘油处理过,并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质,它们对蛋白质和其它生物活性物质有害,用前必须除去。1.将透析管剪成适当长度(10-20cm)的小段,即成透析袋。2.在大体积的2%(m/v)碳酸氢钠和1mmol/LEDTA(PH=8)中将透析袋煮沸10min。3.将透析袋用蒸馏水彻底漂洗。4.将透析袋置1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min。5.透析袋冷却后存放于4度,应确保透析袋始终浸没在液体中。注:从此步起用透析袋时一定要戴手套操作。6.在使用之前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗。注:也可以将透析袋放在广口瓶中充满水,松动瓶盖,于20psi(1.40kg/cm2)高压灭菌10min,代替第四步用1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min的操作。新透析袋如不作如上的特殊处理,则可用沸水煮五至十分钟,再用蒸馏水洗净,即可使用。美国光谱医学公司生产的透析袋大部分是预处理过的,即用型,使用前只需用蒸馏水冲洗即可使用,spectra/por7系列和生物技术级的透析袋基本不含硫化物和重金属离子。使用时,一端用橡皮筋或线绳扎紧,也可以使用特制的透析袋夹夹紧,由另一端灌满水,用手指稍加压,检查不漏,方可装入待透析液,通常要留三分之一至一半的空间,以防透析过程中,透析的小分子量较大时,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过ye时,体积增加50%是正常的。为了加快透析速度,除多次更换透析液外,还可使用磁子搅拌。透析的容器要大一些,可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的透析,可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。检查透析效果的方法是:用1%BaCl2检查(NH4)2SO4,用1%AgNO3检查NaCl、KCl等。为了提高透析效率,还可以使用各种透析装置。使用者也可以自行设计与制作各种简易的透析装置。美国美国光谱医学公司生产的各种型号的透析设备,由于使用对流透析的原理,使透析速度和效率大大提高。