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肌球蛋白树立结构紧凑的创新性设计新标准

2016-04-26      点击:594
    肌球蛋白树立结构紧凑的创新性设计新标准
    肌球蛋白轻链拥有自己的肽链,这点与重链不同。它们不被包括在肌球蛋白家族中,但对形成肌球蛋白酶催化超分子复合体有重要作用。
    肌球蛋白是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术,由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。肌球蛋白实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务。肌球蛋白存在于横纹肌肌原纤维的粗丝中,也存在于平滑肌中,在肌肉运动中起重要作用,心肌细胞损伤越严重,血清CMLC水平越高。
    肌球蛋白用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤,同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔。肌球蛋白加酶标抗体于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。肌球蛋白加底物液显色于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。肌球蛋白终止反应于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。肌球蛋白因其免疫学的特异性强,所以CMLC的测定是迄今为止诊断AMI和研究心肌损伤及保护较特异的生化指标。
    肌球蛋白结果判定可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。肌球蛋白是肌肉结构蛋白的一种,分子量480000,由两条重链(分子量200 000)及四条轻链(两条L2,分子量18 000,L1、L3分子量分别为16 000、25 000)组成,分子构型如豆芽状。两条重链的大部分互相绕成双螺旋状,构成豆芽的茎部;总链的其余部分与轻链一起构成豆芽的豆瓣部分。