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人外周血淋巴细胞未来发展规划

2016-07-19      点击:768
    人外周血淋巴细胞未来发展规划
    人外周血淋巴细胞为带有乳光或微乳光的灭菌水溶液。主要成分是Ficoll 400与泛影酸葡甲胺,适用于从血液分离所需细胞,在医疗和医学生物学研究中广泛应用。其他人及动物多种比重细胞分离液。
    人外周血淋巴细胞因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及细胞带电不同,所以用户在定制分离液时应提供所需分离液的比重、动物的种属及被分离细胞的名称。通常情况下人外周血淋巴细胞是没有分裂细胞的,只有在异常情况下才能发现。人外周血淋巴细胞中的小淋巴细胞几乎都处于G1期或G0期的非增殖状态。体外培养时经一定剂量的植物血凝素(PHA)刺激,T淋巴细胞可转变为淋巴母细胞,重新进入增殖周期,进行有丝分裂。
    人外周血淋巴细胞经过68-72小时(三个周期)的短期培养,即可产生大量的增殖期细胞群,用秋水仙素(细胞分裂阻断剂)积累分裂相,可使处在分裂期的淋巴细胞停留在分裂中期或早中期,从而获得足够的可供分析的中期分裂相。人外周血淋巴细胞先以碘酒和75%乙醇消毒皮肤。用2ml灭菌注射器吸取约0.2ml肝素,作静脉穿刺,抽取外周静脉血1ml。
    人外周血淋巴细胞是体外淋巴细胞培养成败的关键问题,因此,要考虑它的质量和浓度。盐水提取物一般冰冻保存的时间不宜过长,时间长了效价减低。浓度一般用1%~2%,每毫升培养液加0.2~0.4ml;人外周血淋巴细胞浓度过高可能会导致红细胞凝集。培养箱的温度应控制在37±0.5℃,温度过高或过低均会影响细胞生长。培养基的pH值应该在7.2-7.4左右,低了细胞生长不良,高了细胞则会出现轻度的固缩。